dibal-h氰基还原成醛怎么后处理不会凝胶状

RNA提取般步骤总结

RNA提取般步骤总结

^ 2 ^ G＃N1 E; WRNA萃取原理：

/ |＃K0 K. @ 9 W |破碎细胞或组织RNA氯仿等机溶剂萃取并再经沉淀洗涤干燥溶解变性剂由于RNA酶处随能RNA降解所需要注意实验稍疏忽前功尽弃

0 T3 Z（F＆_D6 C％^Y A6 _RNA H6提取般步骤

- O：Y + X $ P＃S8 U4 M9所RNA提取程五关键点即：效破碎细胞或组织本效使核蛋白复合物变性内源性RNA酶效抑制;效RNA提取DNA蛋白质混合物;参与效除糖杂质糖含量高品关键抑制RNA RNA提取阶段两种式使用：提取总RNA核酸沉淀氯化锂;直接酸性条件酸性条件DNA蛋白质提取RNA留水相机相第提取导致量RNA损失种使用电流频率已经非低 （O（克; ^ + K）F + I＆]％P

实验步骤：

* L＆D6 S5 E（Q1 F（G2 | J ^ 0坏组织RNA→沉淀→离RNA→洗涤→保存RNA→解冻RNARNA6 D8} QYg * X

甲破碎组织RNA酶失同进行使用盐酸胍异硫氰酸胍NP-40SDS蛋白酶K等粉碎组织加入β-ME抑制RNA性

S（％）F`0 [1 D *米] 0 e2RNA离般用苯酚氯仿等机溶剂通加入少量异戊醇并步骤离离RNA般布层蛋白质层离

＆X. P）I）YU / L＃[3般用乙醇3M醋酸钠（pH值5.2）或异丙醇沉淀RNA 2 @ 0 D＆Z7 + IG1 @

4用70％乙醇洗涤洗涤RNA避免RNA洗掉步骤省略洗涤干燥或干燥乙醇能太干否则难溶解

3 @％VO9 V + I1 J2 O9 KZ5融化RNA通用于TE

; L5 F N6}（S1吨％Z＆J6保存RNA应低温防止痕量RNase污染离RNA富RNase品（胰脏肝脏）需要要存储甲醛期存储高品质RNA存储特别鼠肝脏RNA水存储星期鼠脾脏提取基本降解RNA提取仍存储水3稳定外度比跟踪RNase降解于4KB誊转录呈现更敏增加RNA品存储稳定性RNA溶解离甲酰胺并存储-70℃保存RNA甲酰胺必须包含自胰腺RNA碎片RNA降解甲酰胺至少节省使用面准备使用RNA：加入醋酸钠0.3 M12000×g离5钟沉淀RNA

P3 [7米* ^ $ U $ _

：F徐* N（（I氯化锂提取总RNA：

U;}'IR'^'^＆升尿素变性蛋白高浓度本发明并抑制RNA酶RNA选择性用氯化锂沉淀特别适合于少量组织RNA提取量品具快速简洁处少量污染DNARNA产量高损失RNA片段缺陷＃?* S：} 9`* R4 Z3 P

检测试剂：

D $ R6 Q_ I8 Q1氯化锂/尿素溶液氯化锂126克（3M）尿素360克（6M）加水至1L通滤灭菌]

7 _8 W1吨O9'QI4 Z2悬浮液[10mMTris-HCl（pH值7.6）1mMEDTA（pH8 0）0.5％SDS]

M8第4季R＆Y：B＃`7测试程：7 [ $`*}; O7 _ Z'{

1进行量组织或细胞每克组织或细胞加入5-10ml氯化锂 - 尿素溶液匀浆器件速度匀浆2钟于数量细胞（107细胞/毫升）每克组织或细胞加入0.5毫升氯化锂 - 尿素溶液手匀浆并转移Eppendof管 ＆Y）B：EQL / ^ Q：\ $号

图2所示匀浆液放置0-4℃412000克离30钟 X-C6 D-N / N0 K表 T2 A

3颗粒加入1/2体积原始匀浆液体氯化锂 - 尿素溶液重复步骤2

）YX）S0 K9 Y6 Je4用1/2体积原匀浆液氯化锂 - 尿素溶液重构沉淀加入等体积苯酚/氯仿/异戊醇室温15-30钟摇组合4000克离5钟

3 D2 VI1（?* D5水清液添加1/10倍体积3M乙酸钠（pH5.2）2倍体积乙醇-20℃进行15000克离

L4Q4 U L：* K％Z $ （E670％乙醇沉淀洗涤并真空干燥3}; R0 [/ Q'G9 Q

RNARNA溶解液溶解沉淀物装保存于-70℃

0 F X％R（H％B7?

Y7 J5 U $ C'|）[％? J3e：Q蛋白酶 - 热酚|^ 0 B *）P3 S * C4 B4 H4升

本发明适合病毒RNA提取

* I（I + B＃RK测试试剂：

$ 4 [7 H9`）蛋白酶K（终浓度50ug/ml）J1J5 P L6 V / T7 [/ I

22×缓冲液：1％SDS20mM Tris-HCl（pH值7.6） 0.2MnaCL9 HP] Y + \ $ Z）O

测试程序：＃W3 [$] 5 Y V8 G1

1纯化病毒溶液加入等体积缓冲液蛋白酶K37℃40-50钟

- K0 - P / E'Q-Z7?G0 M＃{＃D2加入等体积65°?预热酚溶液轻徭薄赋光5钟65℃徭培养

W `; W（E：酷睿i3 ^ 3离取清液氯仿萃取间（Z0 D; J2 7米+ D2 Q＆X?

4取层水相加1/10倍体积3M乙酸钠（pH5.2）2倍体积乙醇-20℃进行1离离5000克（万克10钟）

7 [/瓦特氢气D6 U $ k570％乙醇洗涤沉淀物真空干燥

％A5 Y; {（W％3 * Y O E）P6 RNA溶解液溶解沉淀RNA装保存于-70℃策植物RNA提取程难

策植物RNA提取程难

）O5 B7 D / Q3 _酚类化合物干扰及策：

A9 D * Z3 K 7 W许植物组织特别水（苹樱桃李葡萄等）植物树木植物含丰富酚类化合物酚与植物增加含量更容易轻植物材料RNA提取外针叶树植物落叶植物叶织针酚含量要高氧化匀浆焦黄加深植物材料匀浆酚类物质释放氧化程度增加种现象称褐变影响（BROWNING效）酚类化合物（例醌类）与RNA稳定结合氧化影响RNA离纯化纽伯与酚类总量材料没发现RNA提取难易程度间相关性并非所酚类化合物影响RNA提取般认所谓缩合单宁聚合物羟基黄酮醇类物质（原花青素物质）影响RNA提取类化合物除酚类化合物般初始阶段提取防止氧化离RNA 9 B0 S} 0 U6 | 9 K / L VV G1?/ @

防止氧化酚化合物：

V yA4 K7 N /原Z1：般提取缓冲液加入（ - 巯基乙醇二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸防止酚类氧化提取溶液（ - 巯基乙醇浓度高2％（ - 巯基乙醇等断便苏由酚氧化酶失二硫化物即添加沉淀RNA夜（ - 巯基乙醇（终浓度1％）防止氧化程硼氢化钠（硼氢化钠）酚类化合物原醌原剂用提取缓冲液处理棕色消减醌化合物原酚化合物

＆H Z P +?＆T％T5 G＆G1 M-P / Q U2螯合剂：螯合剂聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）CO-N =基团包括酚化合物强结合能力结合能力与酚化合物芳香环数目增加羟基加强原花青素物质包含许芳香环羟基基团其形稳定复合物与PVP或溶性PVPP使原花青素物质能酚氧化酶酶底物氧化并且提取步骤除随着PVP除酚pH值重要影响素结合酚PVP pH值8.0更迅速降低[11]原花青素单独使用更质量PVPP除所化合物需要与其结合使用

p％N0瓦特/ t7r3Tris-硼酸盐：提取缓冲液含Tris-硼酸盐（pH7.5）其特征于所述硼酸根据带*氢与酚类化合物形复合物抑制酚类氧化与RNA结合种非效所提取缓冲液溶液加入Lбpez-Gбmez再其原剂Tris-硼酸浓度高（> 0.2M）影响RNA收率

＃P8] 0 ^ 8 K3 a4牛血清白蛋白（BSA）（）：物质BSA原花色素产类似溶性或溶性复合物形间抗原 - 抗体相互作用降低材料RNA结合原花色素机提高产率RNA BSAPVPP合并提取液效更由于RNA酶往往含BSA要加入使用肝素抑制核糖核酸酶性 ?＃H / Y（P7 Q）J4）G * W1 G8升

5星丙酮：Schneiderbauer冻结云杉松树山毛榉等-70℃丙酮萃取植物材料与抛光效离高品质植物材料酚醛化合物丰富RNA @ + - X / V9 Z8 T8 H：B3?白c

除酚类化合物：

＆Z＃H）G0 H＆$ I1 N F L9 N李+Ca2 +沉淀RNA未氧化酚类化合物清除PVP溶性PVPP或BSA结合酚类物质直接通离离除或曼宁使用高浓度2 - 丁氧基乙醇（50％）沉淀RNA除苯酚氯仿萃取酚溶解2 - 丁氧基乙醇除含50％2 - 丁氧基乙醇缓冲液洗涤RNA沉淀认甚至酚氧化其氧化产物仍溶解高浓度2 - 丁氧基乙醇溶液除残留酚删除外没必要再使用硼氢化钠处理 C6 Y8 A1 SV：2

糖干扰及策：6 I-B3 R4?$ T＆O

糖污染提取植物RNA经遇另棘手问题植物组织往往富含糖许物理化性质RNA糖非相似难除糖RNA裹着移植性路程导致RNA产量减少; RNA沉淀产糖凝胶状沉淀物例含糖类RNA沉淀溶于水或溶解粘稠溶液由于糖抑制许酶性污染糖RNA品能用于进步物研究传统通SDS-盐酸胍处理部除些糖;氯仿萃取移除些糖由苯酚存高浓度Na +或K +离条件; LiCl沉淀RNA糖部留清液即使通些步骤仍发现相数量糖RNA混合起所需要使用更效式解决污染问题植物RNA离纯化糖

7 ['X / Ed8×（沸点（| 9 C＆n与低浓度乙醇沉淀除糖糖种更提取RNA或溶液缓慢加入水乙醇至终浓度10％至30％并且使沉淀糖RNA保持溶液乙醇溶液加入通植物材料匀浆Lewinsohn RNA萃取裸植物木质茎统乙醇浆料清液加入终浓度10％情况沉淀糖Tesniere葡萄浆组织提取RNA通CsCl超离乙醇沉淀RNA溶液加入终浓度30％乙醇沉淀糖进步纯化RNA品

I5 B5米* Z9八集团M4? - N / D另用醋酸钾沉淀糖加入1/3量5 M醋酸钾（pH4.8）解决案巴赫卢勒云杉组织匀浆提取RNA沉淀糖;安斯沃思鲁梅克斯植物花卉组织RNA提取加入1/5体积5 M钾乙酸乙酯（pH4.8）溶液 Hughes等棉叶花粉RNA提取添加1/3体积8.5M醋酸钾（pH值6.5）溶液匀浆除糖等杂质植物材料RNA提取物述两种组合使用种Lбpez-GбmezRNA提取芒皮匀浆液加入0.25体积水乙醇0.11倍体积5M醋酸钾溶液除糖杂质 Su等除糖藻酸盐单独使用乙醇或醋酸钾效并使用结组合

6 C9 | 5 Q1 B9 [5 L1 S + N缓冲液含高浓度NaCl助于除糖 Chang等提取松树核糖核酸NaCl浓度2.0M1.0M缓冲溶液氯仿萃取乙醇沉淀RNA与糖离RNA曼宁萝卜种其材料苯酚提取清液稀释Na +离浓度调节至80毫米加入0.4体积2 - 丁氧基乙醇沉淀除糖 3 B1 H＃M'{+ {0 U％UK2 @V

蛋白质杂质影响策：$ _at_ - G5 O（F1 S9 _2 V * G2 N / ^

蛋白RNA品污染重要素核糖核酸酶酚氧化酶蛋白质获完整高质量RNA必须效除蛋白杂质传统抑制冷冻条件性RNase等磨碎植物材料;提取缓冲液含蛋白质变性剂苯酚胍十二烷基硫酸钠十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）使匀浆蛋白质变性聚集些蛋白酶K降解蛋白质杂质五月进步除蛋白质用苯酚氯仿萃取 T7五（F1 J9 @ + E

Wilcockson同溶解度使用高氯酸钠溶液蛋白质RNA离 70％高氯酸钠溶液于该蛋白质溶解度RNA溶解度数蛋白质沉淀随通离离清液加入两倍体积水乙醇RNA安顿并溶解70％高氯酸钠溶液残余蛋白保持清液除部蛋白质

3 QE / \ * IA＆@代谢产物影响及策:: N3）N F K＃NP F6 H0 J2 A0 {

另困难植物组织许高等植物组织尤其熟组织产些水溶性级代谢产物提取RNA质量些级代谢产物容易与RNA结合RNA提取满阻碍离物性RNA些级产品能确定具体物质没特别式解决问题贝克休斯等选择性沉淀Chirgwin氯化铯梯度离离纯化松树种熟松树针叶植物组织RNA艾弗森RNA恢复 （M S5 O％FH-Q * \（`（}

难易其物材料植物组织特别高等植物细胞内外复杂性组合物使植物组织RNA提取阶段通实践发现即使同种植物同组织RNA提取同同植物材料包含某种干扰素同RNA提取能适用即使同种植物相同组织材料同基型植物RNA提取能相同于工厂或组织其相应RNA提取必须经探索实践建立 ＃S0＃G7 L3 S＆A

随着植物物研究领域扩我肯定说现新困难RNA提取植物材料程作其研究基础断探索经验积累科家快解决些困难并植物物发展铺平道路些特殊植物RNA提取

些特殊植物RNA提取

$ E * [U（E％H'酚植物RNA提取：JD2 V（R! B＆?

苹棉花酚植物RNA提取采用TRIZOL般没验证效所提取RNA纯度没特别高作北足够 6 J＆D2 U（\ 6 W8 _＆O4 E1 X1吨

试剂：

＃S7 S8? R＃W1 Y＃克提取缓冲区200毫升：氯化钠1.1688克100毫米Tris2.4228克10毫米（Tris-HCl4.0）EDTA5.8450克10mMSDS2.0000克1％NaOH溶液调节至8.0并设置200毫升再加200ulDEPC解冻 * J）; T2 @）T4 W'F

测试步骤：

24 12000rpm进离15min清液转移新试管添加氯仿异戊醇提取间 ）H'L7 D＃DY8 @

3取600ul异丙醇-20℃沉淀20钟

＆W：M2 R：I4 \ L＃J412000转离10min

IY \ 8 b7A5沉淀物用乙醇（70度）

K T. D1 [0 w +）_0 D5 68000RPM 5钟

AY＃}'F（`5} 6我+ NX7沉淀干燥溶解30ulDEPC水^ 0 QR +`5 J（N'['M9号

＃M / R3 O2? T6 Z $`1 M＆E ^

银杏等木本裸植物RNA提取：A I＆V H0` ?

银杏香其木本裸植物代谢物糖离纯化RNA干扰RNA提取质量产量严重影响酚含量物实验展带阻碍目前RNA提取许传统Trizol试剂盒SDS其提取银杏RNA蜀郡张等（1993）CTAB提取RNA质量较差退化非严重改善其提取步骤获更高质量银杏RNA品 / S4我* V K8 S）x

检测试剂：M（Q＃E7 N3吨;`＃I M（[

11M三：12.11克?斯溶解60米L水用浓盐酸PH8 0.0体积LOO毫升菌DEPC水溶解使用

`4 C9 {）P2 \ 4 T2 M EDTA500米：18.61克?DTAH 2O80米升水搅拌至溶解用NaOH pH值调至8.0定容至100ml; V＃X G4 M＃Q3 C5 P * JH4 Y

310摩尔/ LLiCL：42.4 gLiCL 100毫升水溶解即 9 I）@'\＆W + C P * G

图4所示提取缓冲液（DEPC处理）：2％CTAB（蛋白质变性剂）0.2％PVPK 30（除酚）100米摩尔Tris-HCL（pH8.0）25米M EDTA（金属螯合剂混合物）2.0M氯化钠（除糖CTAB）与：10 mL1 mol / L三PVP2克2克CTAB5ML 500毫米EDTA11.7gNaCL音量设置100毫升 ）O + \ 5 E XO＃A（M + P8 H * K9 N0 q

5亚精胺（提取液加少量）（RNA酶抑制剂）

＃J9 G6 O / H（U'D64％稀疏乙醇（添加）提取（除酚）'D ED（J. K $ ZO9 f

7氯仿异戊醇（24：1）（萃蛋白质））U）A +] 4 \＃Q

810 MLiCL（沉淀物RNA）

7 M +）G4 J4 m5C0f-\ 9SSTE（溶解RNA）1.0M氯化钠01m10米MTrisHCL（pH8）：氯化钠2.9克0.25毫摩尔EDTA（pH8.0）5％SDS克SDS0.5毫升1三L 500毫米100 U EDTApH值8.0定容至50 mL M5 Z + J3 X0 V＆\ 6 E7?＃R

测试准备：_5 Z9}F％Q6吨

灰浆玻璃器皿包裹铝箔烘焙温度200℃或至少2或180 * C高温烘烤4信息 X7 N3 WW2} 9 M

2塑料制品（提示管）新裹报纸121'C高压灭菌器消毒40钟或两121'C高压釜每灭菌20钟烤箱烤千

X * F +?V7} A3所溶液制备加DEPC水DEPC UJ浓度0.1％37℃培养夜1211C高压蒸汽灭菌40钟液（Tris没用DEPC所Tris DEPC-处理水溶液制备灭菌处理）

）X＆B {％E ^＆F：S0 q检验程序：Y6 U +`C * \ X2＃R

[据文献（蜀郡张1993）CTAB改进

F ^ + E9 I＃H / Q7 M * A *] 14毫升提取物加入lOmL离离机加热管C卜650C水域 $ D + 4 W7 \ 3 J：WM

2研钵用液氮冷却研钵抗氧化剂PVP加入少量采取1克低温冰箱银杏迅速放置研钵加入液氮研磨程防止叶片熔体充研磨紧接添加预热提取缓冲液并混合与手功能 C4我+ L / Z * C5?）V

365℃1钟冷却至室温水

（N2 _at_）U：S{9 ME8 F4通添加量（4毫升）氯仿：异戊X17（2 = L：1）混合10,000 rpm40C10钟

（H6 P O1 Y8 P＃5星仔细清液加入等体积（4毫升）仿：异戊醇（24：1）并混合10,000 rpm40C离10钟{＃K / Z5? ：X：V1 x

6取清液加入1/4体积IOMLiCL混合4℃沉淀夜10000RPM离20钟

7×P4 O6 Z1 D [8} 7干燥溶解沉淀500U?SSTE 1.5M号离管放炮等体积氯仿：异戊醇混合1万转40C离10钟

H2 b7C1e* [6 R4c8离拉伸清液加两倍体积水乙醇-70℃沉淀至少30钟或20℃沉淀物2 W * C'Y1 P-T5 K表）^`

912000rpm进40C离20钟用70％乙醇洗涤两干燥沉淀 1×S * X0 VY6 F /升

1040 U LDEPC处理水溶解沉淀物RNA品 8 F2 C-S4 R3 O9 R4 T E＆{

11除电泳紫外检测RNA-70℃冰箱备用

Q0 O7 V.] 9 x{1我：__

U * X1 M5 G9（W％U改进克拉普提取：

1 R）R＃S3? Q1诉W测试试剂：

C7 Z1 ^）J5 A＆F＆W（K D1RNA提取掖：母液：4mol异硫氰酸胍20毫摩尔EDTA 20毫摩尔MES pH值7.0工作液：取400毫升母液加入1.7毫升2-ME贮存4 ℃储备/ I $ E. RS％Z

2RNA重新悬浮液：氯化锂10毫摩尔乙酸钠2mol调整终体积250mlpH5.2灭菌存储4℃条件使用 2 U J1 S9 V8 ?

测试步骤：

）O / O型L＃q构-D8 V）U1取新鲜植物材料0.5?1g冻干必要添加至0.2g砂磨起拌匀加入10ml RNA提取掖 7 N Q：BS N9 BJ $ü

24℃8000RPM离10min条件层水相转移干净离管并加入等体积苯酚/氯仿萃取除皱离10钟4℃条件8000RPM

1N：K +] 3 R A7`3清液转移干净离管清液1（添加调匀10毫升氯仿洗涤10ml氯仿4℃条件8000RPM离10min ）

$ P + YP / ^ - W / EGK0 Y：[4清液转移另干净试管加入1/10体积3摩尔乙酸钠2倍体积冷乙醇-80℃降水两条件：T＆M8 C-W5O1 O

54℃8500rpm离30钟条件弃清液沉淀再悬浮RNA再悬浮并4℃放置1条件 9 B7 Z＃K4 V（同期L8 Q0 A8?）I％|

64℃条件8500rpm离10min丢弃清液DEOC沉淀物溶解适体积处理水测试包装保存-70℃条件

不要多想 这样的提问没有意义

很多烦恼都是我们自己找的

吡咯： bi luo 。

基本释义：有机化合物，化学式C4H5N。无色液体，在空气中颜色变深，有刺激性气味。用来制药品。

吡咯简介：

吡咯是含有一个氮杂原子的五元杂环化合物，其分子式为C4H5N，无色液体，沸点130~131℃，相对密度0.9691(20/4℃）。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。吡咯及其同系物主要存在于骨焦油中，煤焦油中存在的量很少，可由骨焦油分馏取得；或用稀碱处理官焦油，书用散软Y口力馏提纯。

以上内容参考?百度百科-吡咯

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